近日，北京大学人民医院、北京大学肝病研究所陈红松研究员团队的最新研究成果“Dominant neoantigen verification in hepatocellular carcinoma by a single plasmid system coexpressing patient HLA and antigen”（《基于共表达患者HLA和抗原肽的单质粒系统验证肝细胞癌优势新生抗原》），在国际肿瘤免疫治疗学会（SITC，Society for Immunotherapy of Cancer）的官方杂志Journal for ImmunoTherapy of Cancer上发表。

在该研究中：研究团队基于自主研发的Co-HA系统（共表达患者HLA和抗原肽的质粒系统，授权专利号：LZ202010634108.1），成功建立了肝癌优势新生抗原筛选鉴定和免疫评估平台，首次在肝癌患者中筛选到优势新生抗原并对其免疫原性进行了深度验证（一种肿瘤新生抗原多肽及其应用，授权专利号：ZL202111576586.2）。

来源于体细胞突变产生的肿瘤新生抗原（neoantigen），具有较高的肿瘤特异性及免疫原性，是肿瘤极具吸引力的免疫治疗靶标。但是，目前基于计算机算法所预测的新生抗原，由于假阳性高导致其很难在临床上进行广泛应用。缺少高效的新生抗原筛选鉴定平台。

因此，研究团队搭建了一套完整的新生抗原筛选鉴定平台，流程如下：1）通过对肿瘤患者的肿瘤组织进行采样测序；2）获取基因变异信息；使用生信算法预测新生抗原；3）利用MHC-肽四聚体染色结合流式细胞术检测新生抗原特异性T细胞；4）通过Co-HA系统鉴定优势新生抗原的免疫原性。研究团队将该平台应用到晚期肝癌患者的新生抗原筛选鉴定工作中，填补了国内在此方面存在的技术短板。

首先，研究团队在14例肝癌患者中鉴定了2875个体细胞突变。使用生信算法预测得到了541个潜在新生抗原。接着，使用MHC-肽四聚体染色法对常见人群HLA（HLA-A*11:01、HLA-A*24:02和HLA-A*02:01）呈递的37个预测的候选新生抗原进行了初步筛选。进一步使用Co-HA系统和免疫评估平台成功鉴定出HLA-A*24:02限制性多肽ENTPD6_Y384C和HLA-A*02:01限制性多肽ALG1_A55S为全新的肝癌优势新生抗原。

同时，研究团队针对新发现的肝癌优势新生抗原开发了特异性TCR-T。利用MHC-肽四聚体染色技术，将ENTPD6_Y384C特异性T细胞进行标记，使用流式细胞术对新生抗原特异性T细胞进行分选，进一步使用Sanger测序技术对这些T细胞的TCR序列进行测序。通过ELISPOT技术检测TCR-T细胞对表达ENTPD6_Y384C的靶细胞的识别杀伤作用，最终获得可高效、特异性识别并结合ENTPD6_Y384C的TCR：S20-1-BA2。在这一过程中，也对肝癌优势新生抗原的免疫原性进行了有效的验证。

该研究的成果有望为晚期肝癌患者的免疫治疗提供真正有效的特异性靶点，为未来肿瘤新生抗原疗法广泛应用于临床奠定理论基础，为肿瘤的精准治疗提供理论和实验依据。

北京大学人民医院肝病研究所陈谱博士研究生和陈冬波助理研究员为论文的共同第一作者，北京大学人民医院陈红松研究员、陈冬波助理研究员、北京可瑞生物科技有限公司谢兴旺博士和桂林医学院附属医院廖维甲教授为论文的共同通讯作者。该研究得到了国家“十三五”科技重大专项基金等资助。

（供稿：肝病研究所  责编：李杨乐）